Magnus Ehingers undervisning

— Allt du behöver för A i Biologi, Kemi, Bioteknik, Gymnasiearbete med mera.

Buffertar (recept)

TB-buffert (1000 ml, 10×)

Den här bufferten används för agarosgelektrofores av proteiner. Receptet ger en buffert som måste spädas 10 gånger (1 + 9) för att kunna användas. Det är viktigt att använda Tris-base och inte Tris-HCl för att elektroforesen ska fungera väl.

  1. Lös
    1. 109 g TRIS-base
    2. 55,6 g borsyra

    i 700 ml avjonat eller destillerat vatten

  2. Ställ pH till 8,5 med 1 M NaOH
  3. Tillsätt vatten upp till 1000 ml
  4. Förvara i rumstemperatur

TBE-buffert (1000 ml, 10×)

TBE-buffert. TBE-buffert. Används för att göra agarosgeler som buffert vid elektrofores av DNA. Receptet ger en buffert som måste spädas 10 gånger (1 + 9) för att kunna användas. Det är viktigt att använda Tris-base och inte Tris-HCl för att elektroforesen ska fungera väl.

  1. Lös
    1. 1 g NaOH
    2. 108 g TRIS-base
    3. 55 g borsyra, H3BO3.
    4. 7,4 g EDTA

    i 700 ml avjonat eller destillerat vatten.

  2. Tillsätt vatten upp till 1000 ml.
  3. Förvara i rumstemperatur.

TE-buffert (100 ml)

TE-buffert är lämplig att lösa och förvara DNA i i de flesta fall. Det gäller dock inte om man ska använda DNA:t för att klippa med restriktionsenzymer. EDTA:n kelatbinder nämligen till metalljoner, som behövs för att restriktionsenzymerna ska kunna fungera. Lös istället DNA:t i destillerat vatten om du ska använda det tillsammans med restriktionsenzymer..

  1. Blanda 200 μl 0,5 M EDTA med 1 ml 1 M TRIS pH 8,0.
  2. Tillsätt vatten upp till 100 ml
  3. Förvara i rumstemperatur.

Transformations­buffert (200 ml)

  1. Lös
    1. 0,61 g PIPES
    2. 0,44 g CaCl2
    3. 3,73 g KCl

    i 180 ml avjonat eller destillerat vatten.

  2. Justera pH till 6,7 med 2,5 M KOH-lösning
  3. Tillsätt 2,18 g MnCl2. pH måste vara under 7,0 för att det inte ska bildas oönskade mangansalter.
  4. Tillsätt vatten till 200 ml.
  5. Sterilfiltrera lösningen genom ett 0,45 μm- eller 0,22 μm-filter. Lösningen går inte att autoklavera; då bildas brunsten (MnO2).
  6. Förvaras i rumstemperatur i steril flaska.

GET-buffert

  1. Lös 0,9 g glukos i 80 ml avjonat eller destillerat vatten.
  2. Tillsätt
    1. 2,5 ml 1 M TRIS pH 8,0
    2. 2 ml 0,5 M EDTA
  3. Tillsätt avjonat eller destillerat vatten upp till 100 ml.
  4. Förvara i rumstemperatur.

Kaliumacetatbuffert

  1. Blanda
    1. 60 ml 5 M kaliumacetat
    2. 11,5 ml isättika
    i 28,5 ml destillerat eller avjonat vatten.
  2. Förvara vid 4°C.
  3. Bufferten ska vara kylskåpskall när man använder den.

SDS/NaOH-lösning

  1. Blanda
    1. 1 ml 10% SDS
    2. 0,8 ml 2,5 M NaOH
    i 8,2 ml destillerat eller avjonat vatten
  2. Värm lösningen något för att lösa ämnena.
  3. Förvara i rumstemperatur i högst 2 dagar. Förvaring vid lägre temperatur gör att ett precipitat bildas.

Spädningsbuffert för bakteriofager

  1. Lös
    1. 4,65 g Na2HPO4·2(H2O) (eller 7,0 g Na2HPO4·7(H2O))
    2. 3,0 g KH2PO4
    i 1000 ml destillerat eller avjonat vatten
  2. Autoklavera lösningen.
  3. Förvaras i kylskåp.

Reducerande provbuffert (20 ml, 4×)

Den här bufferten används för att preparera proteiner för elektrofores (både SDS-PAGE och agarosgelelektrofores) som i laborationen Analys av proteininnehållet i olika matvaror.

Om man vill ha en icke-reducerande provbuffert, byter man ut 2-merkaptoetanolen mot avjonat eller destillerat vatten. Bufferten skall spädas 1+3 innan man använder den.

  1. Blanda

    1. 5ml 1 M TRIS-HCl pH 6,8
    2. 4ml 100%-ig 2-merkaptoetanol
    3. 8ml 100%-ig glycerol
    4. 1,84 g SDS
    5. 0,8 ml 5%-igt bromfenolblått
  2. Tillsätt avjonat eller destillerat vatten upp till 20 ml
  3. Förvara i rumstemperatur

SDS-PAGE elektroforesbuffert (100 ml, 10×)

Receptet ger en buffert som måste spädas 10 gånger (1 + 9) för att kunna användas.

  1. Lös
    1. 3,03 g Tris-base
    2. 14,41 g glycin
    i 80 ml destillerat eller avjonat vatten
  2. Ställ pH till 8,3
  3. Tillsätt vatten upp till 100 ml.
  4. Förvara i kylskåp.

Innan man använder bufferten, måste man tillsätta SDS och späda den. Det man såhär:

  1. Tillsätt 6,5 ml 10 % SDS till 65 ml 10× SDS-PAGE elektroforesbuffert
  2. Späd alltsammans med destillerat eller avjonat vatten till 650 ml. 650 ml är lämplig volym buffert för körning av en minigel.

PBS – fosfatbuffrad saltlösning (100 ml, 10×)

  1. Lös
    1. 7,4 g NaCl
    2. 1,88 g Na2HPO4·7H2O
    3. 0,42 g NaH2PO4·H2O
    i 80 ml destillerat eller avjonat vatten.
  2. Ställ pH till 7,4
  3. Tillsätt vatten till 100 ml
  4. Förvara i rumstemperatur.

PBS-BSA-lösning (10 mg/ml, 10 ml)

  1. Lös 0,1 g BSA (bovint serumalbumin) i 5 ml destillerat eller avjonat vatten
  2. Tillsätt 1 ml 10× PBS
  3. Tillsätt destillerat eller avjonat vatten till 10 ml
  4. Förvara i kylskåp.